Insulin favors acute inflammatory reaction in alloxan-diabetic tilapia during infectious aerocystitis / Insulina favorece a reação inflamatória aguda em tilápia do Nilo aloxano-diabéticas durante aerocistite infecciosa

In vertebrates, the inflammatory reaction is responsible for modulating the initial nonspecific defense until specific immunity is acquired. In this context, numerous studies in mammals have demonstrated the participation of insulin in the inflammatory response, favoring cell proliferation and the migratory capacity of endothelial cells, vascular smooth muscle cells and monocytes, as well as mediating the expression of pro-thrombotic and pro-fibrotic factors. However, little is known about the effect of this peptidic hormone on the inflammatory reaction in teleostean fish. In order to evaluate the participation of insulin in the acute inflammatory response of Nile tilapia, Oreochromis niloticus, during aerocystitis induced by Aeromonas hydrophila, and 48 aloxane-diabetic tilapia were used, constituting two groups: diabetics treated with insulin and diabetics without treatment. After six, 24, and 48 hours of inflammatory stimulation, tilapia were submitted to deep anesthesia for euthanasia and necropsy, and thus, obtaining exudate and harvesting of the swim bladder for analysis of the inflammatory reaction. Based on this premise, the present study demonstrated the participation of insulin in the acute inflammatory reaction of alloxan-diabetic tilapia by favors the cellular accumulation in the exudate, the proliferative effect of fibrous tissue and neovascularization in the inflamed site. Such findings reinforce the old hypothesis that insulin plays an important role in the innate immune response during acute inflammatory reaction, being an important pro-inflammatory hormone. However, Nile tilapia proved to be a promising experimental model for studies and advances in research involving diabetes mellitus.(AU)

Em vertebrados, a reação inflamatória é responsável por modular a defesa inicial não-específica, até que imunidade específica seja adquirida. Neste contexto, inúmeros estudos em mamíferos têm demonstrado a participação da insulina sobre a resposta inflamatória, favorecendo a proliferação celular e a capacidade migratória das células endoteliais, células do músculo liso vascular e dos monócitos, além de mediar a expressão de fatores pró-trombótico e pró-fibrótico. Porém, pouco se conhece o efeito deste hormônio peptídico sobre a reação inflamatória em peixes teleósteos. Para avaliar a participação da insulina sobre a resposta inflamatória aguda em tilápias do Nilo, Oreochromis niloticus, na aerocistite induzida por Aeromonas hydrophila, foram utilizadas 48 tilápias aloxano-diabéticas, constituindo dois grupos: dos diabéticos tratados com insulina e diabéticos sem tratamento. Após, seis, 24 e 48 horas do estimulo inflamatório, as tilápias foram submetidas à anestesia profunda para eutanásia e necropsia, e assim, obtenção de exsudato e colheita da bexiga natatória para analise da reação inflamatória. Partindo-se desta premissa, o presente estudo demonstrou a participação da insulina na reação inflamatória aguda infecciosa de tilápias do Nilo aloxano-diabéticas por favorecer o acúmulo positivo celular no exsudato, assim como o efeito proliferativo de tecido fibroso e a neovascularização no local inflamado. Tais achados reforçam a hipótese de que a insulina desempenha importante papel na resposta imune inata na reação inflamatória aguda, sendo um importante hormônio pró-inflamatório. Contudo, a tilápia do Nilo demonstrou ser um modelo experimental promissor para estudos e avanços em pesquisas envolvendo o diabetes mellitus.(AU)

Caracterização, pesquisa dos genes de virulência e beta-lactamases em Aeromonas hydrophila provenientes de esgoto e lodo tratados / Characterization, investigation of virulence genes and beta-lactamases in aeromonas hydrophila from treated wastewater and sludge

Introdução: Bactérias do gênero Aeromonas estão presentes em ambientes de água doce, salgada e salobra. O isolamento destes microrganismos já foi relatado em água de abastecimento público e alimentos. Algumas espécies podem ser patogênicas ao homem, causando gastrenterites e outras infecções. Isolados de Aeromonas de fontes diversas expressam resistência a antimicrobianos, especialmente a -lactâmicos, devido à presença de enzimas -lactamases. A patogenicidade das espécies se deve à virulência multifatorial, que compreende a produção de enterotoxinas (Act, Alt e Ast), de elastase, presença de flagelo, entre outros. Objetivo: Isolar, identificar e quantificar Aeromonas hydrophila isoladas de esgoto e lodo tratado; pesquisar a ocorrência dos genes de virulência e resistência a -lactâmicos. Material e Métodos: A detecção e quantificação de Aeromonas hydrophila foram realizadas por meio da técnica de membrana filtrante e meio de cultura específico; a identificação foi realizada por meio da PCR utilizando um par de primers específicos para a espécie. Após a confirmação da espécie foi realizado o antibiograma para conhecer o perfil de resistência aos antibióticos; a pesquisa dos genes de virulência act, alt, ast, ela, lip e fla e genes de resistência a -lactâmicos foi realizada por meio da PCR e seqüenciamento. Resultados: Foram analisadas 15 amostras (seis de esgoto tratado e nove de lodo tratado). Destas, somente nove foram positivas para A. hydrophila, obtendo-se 441 colônias típicas, das quais 348 foram positivas, por PCR para identificação do gênero e 209 para identificação da espécie. Os 209 isolados, sendo 92 do esgoto tratado e 117 do lodo tratado, apresentaram os seguintes valores na pesquisa dos genes de virulência: 36 por cento (act), 40 por cento (ast), 78 por cento (alt), 82 por cento (fla), 86 por cento (lip) e 87 por cento (ela) e 100 por cento dos isolados apresentaram pelo menos um dos genes. Para os testes de sensibilidade aos antibióticos todos os isolados foram resistentes a pelo menos um dos antibióticos. A produção de enzimas MBL, ESBL e AmpC foi detectada em isolados. Também foram encontrados genes de resistência cphA, bla TEM e bla MOX, enquanto que os genes bla VIM, bla IMP, bla e bla não foram detectados.

Hematological and immunological responses of Nile tilapia after polyvalent vaccine administration by different routes / Resposta hematológica e imunológica de tilápia do Nilo após administração de vacina polivalente por diferentes vias

The efficacy of a polyvalent bacterin vaccine against Aeromonas hydrophila, Pseudomonas aeroginosa and Enterococcus durans administered by different routes in Nile tilapia was assessed by analyzing hematological and immunological parameters 7 and 21 days after vaccination. Treatments consisted of: non-vaccinated tilapia; tilapia vaccinated by intraperitoneal injection with 2x10(8) formalin-inactivated bacteriaÀmL-1; tilapia vaccinated orally with 2x10(7) formalin-inactivated bacteriaÀg-1, feed for 5 days; tilapia vaccinated by immersion bath in 2x10(7) formalin-inactivated bacteriaÀmL-1, for 20 minutes. Vaccinated fish groups presented higher hematocrit, number of erythrocytes and leukocytes than the non-vaccinated group. Serum agglutination titer of intraperitoneally vaccinated fish was higher on both evaluation periods for the three bacteria strains. Only on day 21 post-vaccination fish from the oral and immersion vaccination groups presented higher serum agglutination titer than the non-vaccinated fish for A. hidrophyla and E. durans. Serum antimicrobial activity in vaccinated fish was higher for P. aeroginosa and E. coli than in non-vaccinated fish on both evaluation periods. The different vaccine administration routes stimulated hematological and immunological responses in Nile tilapia 21 days post-vaccination, but intraperitoneal vaccination presented higher total number of leukocytes, lymphocytes and serum agglutination titer.

Este estudo avaliou a eficácia da administração de vacina polivalente (bacterina), contra Aeromonas hydrophila, Pseudomonas aeroginosa e Enterococcus durans, por diferentes vias de aplicação em tilápia do Nilo, analisando parâmetros hematológicos e imunológicos no 7º e 21º dia após vacinação. Os tratamentos consistiram de: tilápias não vacinadas; tilápias vacinadas via injeção intraperitoneal (i.p.) contendo 2x10(8) bactérias inativadasÀmL-1; tilápias alimentadas com ração contendo vacina na proporção de 2x10(7) bactérias inativadasÀg-1, durante 5 dias; tilápias vacinadas por banho de imersão em 2x10(7) bactérias inativadasÀmL-1, durante 20 minutos. Os peixes vacinados apresentaram maior porcentagem de hematócrito, número de eritrócitos e leucócitos durante o período do experimento, em relação aos não vacinados. O título de aglutinação do soro dos peixes vacinados intraperitonealmente foi superior nos dois períodos de avaliação para todas as bactérias. Apenas no 21º dia os peixes vacinados oralmente e por imersão apresentaram título de aglutinação superior aos peixes não vacinados para A. hidrophyla e E. durans. O soro dos peixes vacinados apresentou maior atividade antimicrobiana para P. aeroginosa e E. coli, do que os peixes não vacinados, nos dois períodos. As diferentes vias de administração da vacina estimularam a resposta hematológica e imunológica da tilápia do Nilo após 21 dias de vacinadas, sendo que o número total de leucócitos, linfócitos, título aglutinante do soro dos vacinados i.p. foi maior do que os demais.

Virulence factors produced by aeromonas hydrophila strains isolated from different sources

Foram comparados alguns fatores de virulência produzidos por amostras de Aeromonas hydrophyla isoladas do meio ambiente aquático, de leite pasteurizado, de material clínico (urina) de uma amostra padräo. Todas as amostras foram positivas para a produçäo de hemolisinas, protease e enzima estafilolítica. A detecçäo de uma enterotoxina e de uma citotoxina, somente näo foi observada na amostra isolada de urina. A positividade no teste de autoaglutinaçäo foi verificada entre as amostras padräo e de alimento. A avaliaçäo de algumas propriedades biológicas do lipopolissacarídeo extraído das amostras estudadas foi realizada através de determinaçäo da DL50 em camundongos e pelo fator dermonecrótico. O estudo "in vivo" dos LPS purificados demonstraram toxicidade evidenciada pela DL50 em camundongo. Lesöes dermonecróticas localizadas foram detectadas pela reaçäo de Schuwartzman, demonstrando o potencial endotóxico do LPS analisado. Camundongos inoculados intraperitonealmente com as amostras estudadas produziram percentagens médias de mortalidade de 50, 55, 75 e 92 por cento, respectivamente para amostras isoladas de alimento, água, amostra-padräo e de urina. Uma significativa correlaçäo foi encontrada entre os fatores de virulência produzidos pelas amostras estudadas. Esses resultados sugerem que amostras de A.hydrophila isoladas de alimentos e de meio ambiente podem desempenhar um importante papel como patógenos, associados com infecçöes humanas